项

目

内

容

摘

要

过去一直认为缸染法存在着污染的风险，以至现有的自动化仪器也实行单片喷染的方式，价格昂贵，操作过于程序化，在基层医院或地市级疾控中心难以推广。本课题计划于2015年1月～2015年12月，在河北廊坊市疾病预防控制中心，利用工作方便，将每日临床标本以缸染法与单片分染方式作对比，以对缸染法的污染风险进行评估。为了解缸染法抗酸染色抵抗污染的能力，课题组每日临床标本直接涂片2份，实验组以单片浸入混合染色，常规工作组以单片分置染色，必要时再辅以1～2片分置染色进行复核。观察实验组是否发现污染情况，其镜检结果与常规工作组间有无显著性差异（P>0.05）。从而判断缸染法抗酸染色在市级疾病预防控制中心推广的可行性。

项目类别

应用

创新类型

技术创新

技术领域

医疗卫生技术

科技活动类型

应用研究

应用行业

卫生

学科分类

检验医学

 一、

项

目

的

立

项

背

景

和

意

义

结核病是由结核杆菌(MTB)感染引起的慢性传染病，中国在世界上22个结核病高负担国家中排名第2，仅次于印度，每年约有13万人死于结核病。据研究，受结核感染的人群中，10.0%的人发展为结核病，如果不采取有效的控制措施，在未来的10年，我国可能有5 000万的感染者发生结核病^[1]。临床标本（如痰）直接涂片抗酸染色显微镜方法检查抗酸杆菌在结核病控制工作中对于发现传染源、确定诊断和治疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。抗酸染色查找痰中抗酸杆菌具有操作简单、无需昂贵的仪器设备、特异性较强，无需进一步确认等优点，因此基层结防控制机构对肺结核的实验室诊断主要依赖于痰涂片检查。而基层痰检实验室普遍存在着检测人员偏少(一般仅1～2人)，痰检工作量过多(一般日工作量超过30张)等特点^[2]，因此，探寻一种检测结果可靠而操作较为简单的筛选方法及简易自动化是非常必要的。过去一直认为缸染法存在着污染的风险，以至现有的自动化仪器也实行单片喷染的方式，价格昂贵，操作过于程序化，在基层医院或地市级疾控中心和难以推广。本课题计划于2015年1月～2015年12月，在河北廊坊市疾病预防控制中心，利用工作方便，将每日临床标本以缸染法与单片分染方式作对比，以对缸染法的污染风险进行评估。从而判断缸染法抗酸染色在市级疾病预防控制中心推广的可行性。

二、 国内外现状及发展趋势

临床标本（如痰）直接涂片抗酸染色显微镜方法检查抗酸杆菌是日常工作中必需的常规检测方法。作为发展中国家开展结核病控制项目时非常符合成本效益原则的细菌学实验室技术，具有诊断传染性肺结核准确性高、检查成本低、设备投入少、检验时间短和能及时准确地评价涂阳患者的治疗效果等优点。除人员、仪器、试剂和方法等因素外，痰标本的质量是影响抗酸杆菌镜检结果的重要一环^[3]，痰标本性状与抗酸杆菌检出率密切相关^[3－5] ，不同性状的痰标本与抗酸杆菌的检出率有很大的关系^[6]。直接涂片冷染法直观、简便、价廉，是诊断临床结核病的重要手段^[7]。冷染法在简化操作步骤，减少染液用量及环境保护上均优于热染法^[2]。目前我国实施的结核病控制策略主要是以痰涂片检查抗酸杆菌的实验方法来发现传染源，此方法设备简单，易于操作，迅速报告结果，特异性高，但敏感性低，同时受痰标本留置时间、标本质量、操作技术等因素的影响^[8]。

缸染法中各试剂组分只要不影响染色效果，均可酌情重复使用（单片分染试剂重新回收利用也是可行的），或经过滤后继续使用，或添加原液继续使用，成本可进一步降低，又是一大优点。缸染法中参与混染的所有涂片必须彻底自然干燥并经固定后才能进入染色步骤，否则未干燥部分若为问题标本极易造成污染并造成染液报废。这种情况的镜检特点是与背景有较为明显差别的陈旧性絮状夹带，并为连续多片污染，染色时一触即污染。除此以外，污染可能来源于涂片或涂片前，而非染色。

三、 项目主要实施内容、工艺技术路线、创新点及技术关键

实施内容

1　临床标本来源　2015年1月～2015年12月，河北廊坊市疾病预防控制中心所有检查抗酸杆菌的临床标本（主要是痰）预计6000-7000份。

2　试剂  抗酸染色液由珠海贝索生物技术有限公司提供，产品批号及开封后在有效期及规定时间（开封后6个月）内使用，保存良好，本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加温（快速冷染法）。

3　方法  对每日标本直接涂片2份，1份用作实验组（缸染法），1份用作常规工作组（单片分染法）；取2周内已检查的阴性痰标本直接涂片3份作为实验组阴性无污染对照。

4　复核  对缸染法检出而单片分染法未检出者，再涂1～2片单片分染，以单片分染的2～3片的最终结果为准。

5　统计学处理  用SPSS13.0统计软件中配对计数资料比较的c²检验分析。

三、 项目主要实施内容、工艺技术路线、创新点及技术关键

创新点

缸染法无污染情况，检出者又有建议复核的程序，那么缸染法若能实行简易自动化，将会大大减轻基层综合性医院的工作强度，同时仪器价格低廉，也有利于推广。即使没有简易自动化，缸染法手工操作也简单易行，比单片分置手动染色效率要高得多，也能为所有工作人员减轻工作强度提供了有力的理论依据和坚实的践证基础。

技术关键

1   实验组与常规工作组检查临床标本镜检，计算总检出率，SPSS13.0分析两组间统计学差异。

2   观察实验组中污染情况，实验组中抗酸杆菌条数，常规工作组中抗酸杆菌条数，复核结果与实验组比较；计算实验组筛选率。

    工艺技术路线图

工艺技术路线

        临床标本直接涂片2份

   ↓                                   

实验组                       常规工作组

↓                 ↓                              

以单片浸入混合染色(缸染法)    以单片分置染色

               ↓                              

观察两组发现污染情况，实验组镜检结果与常规工作组间有无显著性差异

  ↓                                

分析缸染法抗酸染色在疾病预防控制中心推广的可行性。

  四、

预

期

目

标

及

成

果

水

平

预期实验组中未见污染情况，说明缸染法在日常工作中可以使用。为保险起见，检出者建议复核，毕竟每日工作中的检出片为数是很少的。预期实验组的总检出率为6%左右，结合既往登记记录，需要复核的就更少，也就是说对已知感染患者可不予复核。

预期结果表明：缸染法可以作为未检出抗酸杆菌的筛选方法，该方法简便、快速价廉，只需要最少的实验设备，是最符合成本－效益原则的细菌学实验室技术。

缸染法若能实行简易自动化，将会大大减轻基层综合性医院的工作强度，同时仪器价格低廉，也有利于推广。即使没有简易自动化，缸染法手工操作也简单易行，比单片分置手动染色效率要高得多，也能为所有工作人员减轻工作强度提供了有力的理论依据和坚实的践证基础。

查阅文献显示，国内尚未有相同或相似报道，因此，该成果可达国内先进水平。

  五、

研

究

进

度

安

排

1、2015年1月15日前，设计好各项研究方案，准备人员培训资料。

2、2015年1月30日前，进行各项基础资料的收集整理、对参与研究的检验人员进行相关的培训和安排、设备校验。

3、2015年2月-4月，进行各项检验工作并将检验结果进行整理分析，同时对检验中发现的异常事件做分析，举办小组讨论会，汇报阶段工作进展。

4、2015年12月前完成课题工作检验分析，进行数据统计、论文撰写和科研成果申报。

六、 现有工作基础、特色和优势

现有工作基础

目前，科研小组已经查阅了课题相关文献，并做了预备检验实验10余例，获得成功。文献目录如下（对应本报告书文献目录）

[1] 王华钧，孙小军，金法祥，等．4种结核分枝杆菌检测方法的比较[J]．中华医院感染学杂志，2012，22（11）：2472－2474．

[2] 张小芬，刘平.抗酸染色冷染法和热染法查找痰中结核杆菌效果比较[J]．实用预防医学，2010，17（10）：2101－2102．

[3] 林桂伟，余央云．不同性状痰标本抗酸杆菌镜检结果比较[J]．浙江预防医学，2012，24（12）：93－94．

[4] 叶美霞．不同痰标本质量的抗酸杆菌镜检结果分析[J]．浙江预防医学，2011，23（6）：95－96．

[5] 徐亚华．痰标本质量对结核杆菌镜检阳性率的影响[J]．浙江预防医学，2012，24（5）：93－94．

[6] 赵永胜，赵凤仙．1110份痰标本直接涂片检查抗酸杆菌结果比较[J]．口岸卫生控制，2011，16（1）：33－34．

[7] 赵斌，贾继芳．抗酸杆菌冷染法的临床应用分析与研究[J]．当代医学，2012，18（25）：107－108．

[8] 李国刚，董彬，李俊娟，等．运用不同实验方法提高菌阳肺结核患者检出率的实施性研究[J]．河北医药，2009，31（21）：2860－2861．

[9] 王苏民．结核病及其实验技术的现状与展望[J]．中华检验医学杂志，2001，24（2）：71－72.

[10] 中国疾病预防控制中心．痰涂片镜检质量保证手册[M]．中国协和医科大学出版社，2004：5－18．

特色和优势

缸染法中各试剂组分只要不影响染色效果，均可酌情重复使用（单片分染试剂重新回收利用也是可行的），或经过滤后继续使用，或添加原液继续使用，成本可进一步降低，又是一大优点。

缸染法无污染情况，检出者又有建议复核的程序，那么缸染法若能实行简易自动化，将会大大减轻基层综合性医院的工作强度，同时仪器价格低廉，也有利于推广。即使没有简易自动化，缸染法手工操作也简单易行，比单片分置手动染色效率要高得多，也能为所有工作人员减轻工作强度提供了有力的理论依据和坚实的践证基础。

绩效目标

缸染法若能实行简易自动化，将会大大减轻基层综合性医院的工作强度，同时仪器价格低廉，也有利于推广。即使没有简易自动化，缸染法手工操作也简单易行，比单片分置手动染色效率要高得多，也能为工作人员减轻工作强度。

产出

单就我疾控中心预计，每年可节约检验费用50000-60000元。

预计在原来工作强度和人员配置基础上，工作强度不变，可减少工作人员1名。

结果

有关成果以技术交流会的形式在省内其它基层医院与疾控中心推广